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collagenX(COL-10)免疫熒光試驗

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通過不同顏色熒光標(biāo)記不同的靶標(biāo),可以直觀的觀察同一樣品細(xì)胞內(nèi)不同結(jié)構(gòu)和蛋白。熒光標(biāo)記靶標(biāo)的方法主要包括熒光染料、免疫標(biāo)記、熒光融合蛋白等——這幾種方法均可選擇性標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)的結(jié)構(gòu)和蛋白,讓您在成像時更輕松地進(jìn)行觀察。細(xì)胞生物學(xué)采用的很多熒光工具基本上都是熒光基團(tuán)。這些熒光基團(tuán)經(jīng)過不同的方法修飾或結(jié)合到不同的分子上,從而具備了某些的功能與特定的細(xì)胞器或蛋白結(jié)合。通過化學(xué)修飾,單個熒光基團(tuán)可以產(chǎn)生許多變體形式,且每種變體都有不同的特異性。免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)用于顯示和檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的抗原或半抗原物質(zhì)。collagenX(COL-10)免疫熒光試驗

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細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗注意事項:非特異性染色:是否滅活內(nèi)源性過氧化物酶;孵育過程中干片;抗原熱修復(fù)過度。染色過深:一抗?jié)舛冗^高;染色試濃度過高或孵育時間過長;染色劑濃度過高或孵育時間過長。通常實(shí)驗室先固定細(xì)胞再進(jìn)行通透,但若檢測抗原是水不溶性蛋白,可先通透再固定,這樣可以通過通透去除一些水溶性蛋白,進(jìn)而可降低免疫熒光背景和非特異性信號;建議設(shè)陰性對照組,消除由于抗體非特異性結(jié)合而產(chǎn)生的背景染色;選擇醛類固定液時,保持其新鮮度,較好現(xiàn)配現(xiàn)用,使用不新鮮的醛類固定液自發(fā)熒光背景會升高。collagenX(COL-10)免疫熒光試驗免疫熒光技術(shù)利用熒光染料標(biāo)記的抗體與目標(biāo)分子結(jié)合,從而實(shí)現(xiàn)可視化檢測。

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免疫熒光應(yīng)用范圍:其應(yīng)用范圍極其普遍,可以測定內(nèi)分泌、蛋白質(zhì)、多肽、核酸、神經(jīng)遞質(zhì)、受體、細(xì)胞因子、細(xì)胞表面抗原、肉瘤標(biāo)志物、血藥濃度等各種生物活性物質(zhì)。根據(jù)診斷類別,又可分為傳染性疾病、內(nèi)分泌、藥物檢測、免疫學(xué)、血型鑒定等。許多物質(zhì)都可產(chǎn)生熒光現(xiàn)象,但并非都可用作熒光色素。只有那些能產(chǎn)生明顯的熒光并能作為染料使用的有機(jī)化合物才能稱為免疫熒光色素或熒光染料。異硫氰酸熒光素為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末,易溶于水或酒精等溶劑。分子量為389.4,較大吸收光波長為490495nm,較大發(fā)射光波長520530nm,呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光。

熒光的產(chǎn)生:一此化學(xué)物質(zhì)能從外界吸收并儲存能量(如光能、化學(xué)能等)而進(jìn)入激發(fā)態(tài),當(dāng)其從激發(fā)態(tài)再回復(fù)到基態(tài)時,過剩的能量可以電磁輻射的形式放射(即發(fā)光)。熒光發(fā)射的特點(diǎn)是:可產(chǎn)生熒光的分子或原子在接受能量后即刻引起發(fā)光;而一旦停止供能,發(fā)光(熒光)現(xiàn)象也隨之在瞬間內(nèi)消失??梢砸鸢l(fā)熒光的能量種類很多,由光激發(fā)所引起的熒光稱為致熒光。由化學(xué)應(yīng)所引起的稱為化學(xué)熒光,由X線或陰極射線引起的分別稱為X線熒光或陰極射線熒光。熒光免疫技術(shù)一般應(yīng)用致熒光物質(zhì)進(jìn)行標(biāo)記。免疫熒光技術(shù)可以用于研究細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的定位和表達(dá)水平。

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免疫熒光間接法測抗體實(shí)驗注意事項:1)熒光染色后一般在1h內(nèi)完成觀察,或于4℃保存4h,時間過長,會使熒光減弱。2)每次試驗時,需設(shè)置以下三種對照:①陽性對照:陽性血清+熒光標(biāo)記物②陰性對照:陰性血清+熒光標(biāo)記物③熒光標(biāo)記物對照:PBS+熒光標(biāo)記物3.已知抗原標(biāo)本片需在操作的各個步驟中,始終保持濕潤,避免干燥。4.所滴加的待檢抗體標(biāo)本或熒光標(biāo)記物,應(yīng)始終保持在已知抗原標(biāo)本片上,避免因放置不平使液體流失,從而造成非特異性熒光染色。免疫熒光技術(shù)可以用于研究植物病理學(xué)和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。COL-2免疫熒光染色

在實(shí)際工作中,熒光抗原技術(shù)應(yīng)用較少,因此通常將其稱為熒光抗體技術(shù)或免疫熒光技術(shù)。collagenX(COL-10)免疫熒光試驗

細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗注意事項:1、建議細(xì)胞直接種孔板,采用倒置熒光顯微鏡拍照,這樣可以避免然后挑片時造成劃片或細(xì)胞片破損以及然后封片可能造成滑片等結(jié)果;2、若實(shí)驗室只有正置熒光顯微鏡,則需要將細(xì)胞植于細(xì)胞爬片。建議直接購買處理過的細(xì)胞爬片;若只有普通細(xì)胞爬片,可以先將爬片于濃酸(濃酸腐蝕性強(qiáng),注意操作)或 75% 乙醇浸泡過夜,若用酸浸泡過夜,第二天先用自來水小心沖洗掉爬片殘留的酸液,若用 75% 乙醇浸泡,則不需要此步驟。然后,用洗潔精搓洗爬片,然后用去離子水清洗爬片。置于烘箱 80 ℃ 烘干,再將爬片置于超凈臺造紫外消毒后備用。collagenX(COL-10)免疫熒光試驗

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